fa جداسازی و کشت سلول‌های بنیادی اپی‌درم بین فولیکولی پوست نوزاد تازه متولد شده موش بدون استفاده از لایه مغذی سلول‌های بنیادی Stem Cells تحقيقي Original Articles زمینه و هدف : اپی‌درم لایه خارجی پوست بدن است که به‌طور مداوم تجدید می‌شود. سلول‌های بنیادی اپی‌درمی نقش مهمی در ترمیم بافتی، ترمیم زخم و شکل‌گیری نئوپلاسم به‌عهده دارند. این مطالعه به منظور جداسازی و کشت سلول‌های بنیادی اپی‌درم بین فولیکولی پوست نوزاد موش بدون استفاده از لایه مغذی انجام شد. روش بررسی : این مطالعه تجربی روی 4 سر موش نژاد NMRI تازه متولد شده صفر تا سه روزه و وزن تقریبی 60-70 گرم انجام شد. کراتینوسیت‌های اپی‌درم به‌صورت مکانیکی و آنزیمی از پوست موش‌ها جدا و روی سوبسترای کشت فیبرونکتین- کلاژن 1 گسترده شدند. سلول‌های بنیادی اپی‌درمی مفروض به‌وسیله اتصال سریع در بازه زمانی 10 دقیقه روی این ماتریکس مرکب از فیبرونکتین- کلاژن انتخاب گشتند. سلول‌های نچسبیده دور ریخته شدند و سلول‌های چسبیده در محیط کشت EMEM (فاقد کلسیم) شامل 0.05 میلی‌مولار کلسیم، سرم جنین گاوی 9 درصد، محیط کشت ثانویه 50 درصد، فاکتور رشد اپی‌درمی و کلراتوکسین کشت داده شدند. از آنالیز ایمونوسیتوشیمی بتا1- اینتگرین برای تشخیص بنیادی بودن سلول‌ها استفاده شد. یافته‌ها : نتایج نشان داد که اتصال سریع سلول‌ها باعث خلوص 50 درصد می‌شود. با استفاده از این روش، سلول‌های بنیادی بدون تغییر در ویژگی‌های سلولی رشد می‌کنند. سلول‌های بنیادی اپی‌درمی جدا شده، مارکر ویژه این سلول‌ها، بتا1- اینتگرین را بیان کردند که هویت بنیادی بودن آنها را نشان داد. نتیجه‌گیری : نتایج این مطالعه نشان داد که حاصل جداسازی و کشت سلول‌های بنیادی اپی‌درم بین فولیکولی پوست نوزاد موش بدون استفاده از لایه مغذی، سلول‌های بنیادی اپی‌درمی زنده‌ای است که می‌تواند در سلول درمانی و پزشکی ترمیمی به‌کار رود. Background and Objective: Epidermis is the outer layer of skin, regenerating continuously. Epidermal stem cells play important roles in tissue regeneration, scar regeneration and neoplasm formation.This study was displayed for the isolation and culture of interfollicular epidermal stem cells from newborn mouse skin without feeder layer. Materials and Methods: This experimental study was displayed on 0-3 old-day newborn NMRI mouse skin 60-70 gr weight. The epidermal keratinocytes were separated mechanically and enzymatically from 0-3 old day newborn mice skin (NMRI strain) and seeded on fibronectin-collagen culture substrates. Putative epidermal stem cells were selected by rapid adherence for 10 minutes on this composite matrix of type 1 collagen and fibronectin and the unattached cells were discarded and attached cells were cultured in essential minimal eagle medium (EMEM) (ca+2-free culture medium containing 0.05 mM Ca+2, 9% FBS, 50% conditioned medium, EGF (epidermal growth factor) and Cholera Toxin. The immunocytochemistry of β1-integrin analysis used to indicate their stemness nature. Results: The results indicated that rapid adherence yields 50% purity. By using this method, the stem cells have been subcultured continuously without any change in the cell properties. The isolated interfollicular epidermal stem cells, expressed epidermal stem cells special marker (β1-integrin) in high levels, which indicates stem cell nature. Conclusion: This new method yields pure viable epidermal stem cells that can be used in regenerative medicine and cell therapy. سلول‌های بنیادی اپی‌درم بین فولیکولی , لایه مغذی , بتا1- اینتگرین , کراتینوسیت Interfollicular epidermal stem cells, Feeder layer, β1-integrin, Keratinocyte 31 38 http://goums.ac.ir/journal/browse.php?a_code=A-10-1-622&slc_lang=fa&sid=1 Sheikhani N (BSc) ناهید شیخانی 5900319475328460050733 5900319475328460050733 No MSc Student in Developmental Biology, School of Biology, Damghan University, Damghan, Iran دانشجوی کارشناسی ارشد زیست شناسی سلولی - تکوینی، دانشکده زیست شناسی، دانشگاه دامغان Haji Ghasem Kashani M (PhD) مریم حاجی قاسم کاشانی kashani_tmu@yahoo.com 5900319475328460050734 5900319475328460050734 Yes Assistant Professor, Department of Cellular and Molecular Biology, School of Biology and Institute of Biological Sciences, Damghan University, Damghan, Iran استادیار گروه سلولی و مولکولی ، دانشکده زیست شناسی و پژوهشکده علوم زیستی ، دانشگاه دامغان Ghorbanian MT (PhD) محمدتقی قربانیان 5900319475328460050735 5900319475328460050735 No Assistant Professor, Department of Cellular and Molecular Biology, School of Biology and Institute of Biological Sciences, Damghan University, Damghan, Iran استادیار گروه سلولی و مولکولی ، دانشکده زیست شناسی و پژوهشکده علوم زیستی ، دانشگاه دامغان